Her kan du etablere sCRAM (suboptimal protospacer adjacent motif (PAM)-mediert CRISPR RNA og Cas12a nuklease kombinert med multienzym isotermisk rask amplifikasjon), en rask og ekstraksjonsfri-diagnoseplattform som oppdager ASFV innen 20 minutter. sCRAM integrerer et raskt nukleinsyrefrigjøringstrinn (40 grader, 5 min) med en ett-rørreaksjon som kombinerer multienzym isotermisk amplifikasjon (MIRA) og en suboptimal PAM-mediert CRISPR/
Cas12a-system (37 grader, 15 min), muliggjør instrument-fri visuell avlesning via UV-lys eller lateral flow strips (LFS).sCRAM demonstrerer enkelt-kopideteksjonssensitivitet og viser ingen kryss-reaktivitet med fem vanlige svinepatogener (PRRSV, PPV, JEV, PCV). Evalueringen av 111 simulerte og kliniske prøver (inkludert blod, plasma og vattpinner) viste en 100 % samsvar med qPCR for UV-avlesning og 98,20 % for LFS
avlesning, med begge metodene som viser 100 % spesifisitet. Enkelheten, hastigheten og felttilpasningsevnen til sCRAM understreker potensialet for desentralisert ASFV-overvåking i ressurs-begrensede innstillinger, og tilbyr et kraftig verktøy for å begrense utbrudd.
I denne studien utviklet vi sCRAM, en rask og felt-distribuerbar ASFV-deteksjonsplattform som integrerer suboptimal PAM-mediert CRISPR/Cas12a med multienzym isoterm forsterkning. Analysen oppnår enkelt-kopi 1 kopi/uL-sensitivitet innen 20 minutter og viser ingen kryss-reaktivitet med store svinepatogener. Klinisk validering på tvers av blod-, plasma- og vattpinneprøver viste full samsvar med qPCR ved bruk av UV-lysavlesning og 98,20 % nøyaktighet via laterale strømningsstrimler. Med forenklet drift, høy sensitivitet og spesifisitet, og tolkning av visuelle resultater, tilbyr sCRAM et stort potensial for-ASFV-overvåking på stedet og bredere-omsorgsdiagnostiske applikasjoner.
