RPA-CRISPR/Cas12a-systemet i denne studien oppnår rask (30–40 min), ultra-sensitiv (1 kopi/μL) HCMV-deteksjon ved å målrette mot det tidlige-uttrykte UL123-genet, og overgå konvensjonelle metoder i klinisk prøvetesting. Denne innovasjonen med{9}lavbelastning{9}muliggjør infeksjoner{9} i tide. spesielt hos immunkompromitterte pasienter, og understreker gjennomførbarheten av CRISPR-basert diagnostikk for å forbedre behandlingen av HCMV{12}}relaterte sykdommer. Analysens enkelhet og effektivitet fremhever potensialet som et-punkt{15}}vareverktøy for ressursbegrensede-innstillinger.
Mønstre for RPA-amplifikasjonssteder og utvalg av sett.
(A) RPA-primerdesign angående plasseringen av amplifikasjonsfragmenter. Piler indikerer baseposisjonene fra begynnelsen til slutten av det amplifiserte fragmentet med P1-P6-primerne.
(B) Agarosegelelektroforesebildet av RPA-produktet amplifisert med 6 HCMV-primersett.
(C) Screening av amplifikasjonseffektiviteten til RPA-sett fra forskjellige selskaper. P: Primer, NC: Negativ kontroll.
Resultatene indikerte at AmpFuture-settet viste den høyeste amplifikasjonseffektiviteten.
Sammenligning av positive rater av MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method og qPCR i kliniske prøver.
Vi samlet inn blod- og urinprøver fra 48 kliniske pasienter. Genomisk DNA ble ekstrahert fra disse prøvene ved å bruke TIANamp Genomic DNA Kit, og resultatene av UL122-deteksjon ble analysert via PCR-fluorescerende probemetoden. Ved å sammenligne resultatene våre med kliniske diagnoser, identifiserte metodene våre 6 positive prøver som var negative i kliniske tester.
