Staphylococcus hemolyticus er en gram-positiv koagulase-negativ bakterie som er veldig vanlig på sykehus. De siste årene har infeksjoner på sykehuset fått økende oppmerksomhet på grunn av deres høyere risiko. Staphylococcus hemolyticus kan ytterligere forårsake hudinfeksjoner, hjernehinnebetennelse, peritonitt og til og med sepsis. Forsinkelser i klinisk diagnose kan føre til forverring av helsetilstand, så rask diagnose av S. hemolyticus er nøkkelen til presis behandling.
Forskerteamet til lærer Ji Tuo fra Central Laboratory Department of the Second People's Hospital of Lianyungang, Kina publiserte en artikkel "En rask og visuell deteksjon av Staphylococcus Haemolyticus i kliniske prøver med Mira-LFS" i tidsskriftet "Analytica Chimica Acta", med en påvirkningsfaktor på 6.2.
1. Research Oversikt
I denne studien ble en Mira-LFS-metode basert på MVAA-genet etablert for å oppdage Staphylococcus hemolyticus. Det multi-enzymet isotermiske hurtige nukleinsyreforsterkningsteknologi MIRA ble kombinert med lateral strømningsteststripe LFS for å oppnå rask patogendeteksjon.
Eksperimentet ble utført ved 37 grader, og resultatene kunne oppdages innen 9 minutter. Deteksjonsfølsomheten var 0. 147cfu/reaksjon.
MIRA-LFS-deteksjonsmetoden er egnet for fastpunktdeteksjon av Staphylococcus hemolyticus i kliniske prøver, og realiserer POCT-metoden for å identifisere Staphylococcus hemolyticus, som er av stor verdi for hurtig sykdomsdiagnose og behandling i områder med undervurderte medisinske tjenester.
Forskerteamet brukte MIRA-LFS, QPCR og tradisjonelle bakteriekulturmetoder for å analysere 95 tilfeldige kliniske prøver og bekreftet den kliniske anvendeligheten.
2. Forskningsmetoder
Det skjematiske diagrammet over Mira-LFS-deteksjon er vist ovenfor.
Forskningen brukte AMP-Future Biotechs DNA-isotermiske hurtigforsterkningssett (kolloidal gullteststripetype) og nukleinsyretilleggsteststrimler.
MVAA -genprimerlengden er 30-35 nukleotider, og amplifiseringsproduktlengden er 100-350 bp. Totalt 6 par kandidatprimere ble designet. MIRA -analyse ble utført ved bruk av gDNA av standard Staphylococcus hemolyticus -stammer, kandidatprimere ble screenet, og amplifiseringsprodukter ble vist ved bruk av 2% agarosegelelektroforese.
Designer deretter sonden basert på den fremre primersekvensen (utvider 16 bp bakover). Den 5 'enden av sonden ble merket med FITC og 3' enden ble merket med C3 -blokkering. Bruk THF til å erstatte det 31 nukleotid i sonden. THF er 30 bp fra 5 'enden og 15 bp fra 3' enden. Den 5 'enden av den valgte omvendte primeren er merket med biotin.
Videre optimaliserte forskerteamet reaksjonsbetingelsene for MIRA-LFS-deteksjon av Staphylococcus hemolyticus. Test med 37 grader med intervaller på 2 minutter fra 4 til 12 minutter. Resultatene vises ved 8 minutters reaksjonstid og testlinjen er tydelig synlig. I tillegg utføres tester med intervaller på 5 grader fra 22-52 grad. 37-42 grad er den mest passende temperaturen for Mira-LFS-deteksjon. Derfor er den optimale reaksjonstid og temperatur på MIRA-LFS-metoden for Staphylococcus hemolyticus henholdsvis 8 min og 37 grader. Sammen med det endelige resultatet som blir visualisert med LFS i løpet av 1 minutt, er den totale deteksjonstiden 9 minutter.
3. Eksperimentelle resultater
Følsomhetsverifisering
MIRA-LFS-analyse ble utført på forskjellige konsentrasjoner av genomisk DNA (gDNA) oppnådd fra serielt fortynnet Staphylococcus Haemolyticus-kulturer (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Probabilistisk enhetsregresjonsanalyse viste at 95% LOD bestemt av MIRA-LFS-analysen var 0. 147 CFU/reaksjon.
Spesifisitetsverifisering
Ved å analysere 18 vanlige patogene mikrobielle stammer og 15 kliniske Staphylococcus hemolyticus-stammer, ble selektiviteten til MIRA-LFS påvisning av Staphylococcus hemolyticus bestemt. Resultatene viste at MIRA-LFS-testen var negativ for 18 andre patogene bakterier og positive for 15 verifiserte kliniske prøver av Staphylococcus Haemolyticus.
MIRA-LFS-deteksjon er svært selektiv og egnet for screening av Staphylococcus hemolyticus.
Faktisk prøvetesting
Lianyungang Second People's Hospital samlet tilfeldig 95 prøver, inkludert 35 hud- og bløtvevsprøver, 16 urinprøver, 14 sputumprøver og 30 blodprøver.
Resultatene viste at deteksjonsmetoden var 100% konsistent med qPCR -metoden. I tillegg, sammenlignet med gullstandarden (GB/T4789. 11-2003), var følsomheten og spesifisiteten til MIRA-LFS-deteksjonsmetoden for å identifisere Staphylococcus hemolyticus-infeksjon 100% og 98,73%. Disse resultatene bekreftet den tekniske gjennomførbarheten av denne metoden videre for å oppdage Staphylococcus hemolyticus i kliniske prøver.
MIRA-LFS-metoden brukes for rask POCT-deteksjon av Staphylococcus hemolyticus. Det er effektivt, nøyaktig, enkelt og rimelig, og hjelper til med å ta raske diagnose- og behandlingsbeslutninger.
Lær om Mira -teknologi
Amp-Futures multi-enzymisotermiske hurtige nukleinsyreforsterkningsteknologi forsterker nukleinsyrer ved en konstant temperatur på 39 grader -42 grad, med en reaksjonstid på bare 5-20 minutter. I tillegg er det ikke påkrevd strenge laboratorieforhold, og applikasjonsscenariene er diversifisert: Generelle sykehuslaboratorieavdelinger, primæromsorg, hjemmetesting, felt osv.
Reagensproduktformer er forskjellige: frysetørket pulver, frysetørkede mikrosfærer osv.; Displayresultatene er forskjellige: gelelektroforese, fluorescenskurve, kolloidale gullteststrimler, etc. Reagenset har stabil ytelse, er lett å betjene og er praktisk for lagring og transport.
Med MIRA som kjerneplattformteknologi har den utviklet en serie støtteprodukter som "ultra-rask nukleinsyrefrigjøringsteknologi", "Dual-Channel isotermisk fluorescensdetektor", "Integrert helautomatisk lukket deteksjonssystem", "selvtesting av nukleinsyredeteksjonen", etc. Lag en samlet løsning for rask molekulær deteksjon.